DOI: 10． 3969 / j． issn．  1671 － 4695． 2018． 22． 001 文章编号: 1671 － 4695( 2018) 22 － 2353 － 04

甘氨酸转运体 1 抑制剂 M22 对小鼠癫痫认知损害作用的研究

林力峰 梁维 刘洲 孙超文 钟望涛^* ( 广东医科大学附属医院神经内科 广东 湛江 524001)

【摘要】 目的 观察甘氨酸转运体 1 抑制剂( M22) 对癫痫小鼠认知损害的作用。方法 选取 40 只 C57BL /6 小鼠腹腔注射戊四氮建立慢性点燃癫痫模型，将其随机分为模型组( 20 只) 和M22 组( 20 只) ，另选取10 只为对照组，腹腔注射生理盐水 2 周; 随后 M22 组灌胃 40  mg / ( kg·d) 的 M22，模型组和对照组灌胃生理盐水，均 2 周。Morris 水迷宫实验评估小鼠学习及记忆功能:  逃避潜伏期、目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内游泳距离占总距离百分比。处死后取脑组织，对海马区进行组织病理学观察，并检测大脑皮层神经元细胞凋亡情况及大脑皮质凋亡相关蛋白 B 淋巴细胞瘤 － 2 基因( Bcl － 2) 、Bcl － 2 相关 X 蛋白( Bax) 、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶( Caspase － 3) 表达情况。结果  M22 组和模型组小鼠逃避潜伏期均显著长于对照组( P  ＜ 0． 05) ，M22 组显著短于模型组( P  ＜ 0． 05) ; 3 组逃避潜

伏期均随时间的延长显著缩短( P  ＜ 0． 05) ; M22 组和模型组小鼠目标象限内停留时间占总时间百分比、目标象限内停留距离占总距离百分比、大脑皮质 Bcl － 2 蛋白相对表达量均显著低于对照组( P  ＜ 0． 05) ，M22 组显著高于模型组( P

＜ 0． 05) ; 海马组织病理学发现，模型组细胞排列紊乱，结构及轮廓模糊，且出现明显神经细胞空泡样改变; M22 组细胞轮廓清晰，少量细胞空泡变性，无明显坏死; M22 组和模型组大脑皮质神经元细胞凋亡率、Bax、Caspase － 3 蛋白相对表达量显著高于对照组( P  ＜ 0． 05) ，M22 组显著低于模型组( P  ＜ 0． 05) 。结论  M22 可显著改善癫痫小鼠的认知功能损

害，其机制可能是通过增强 Bcl － 2 蛋白表达、抑制 Bax、Caspase － 3 蛋白表达，而抑制大脑皮质神经元细胞凋亡。

【关键词】 小鼠 癫痫 甘氨酸转运体 1 抑制剂 认知损害 凋亡相关蛋白

Effect of glycine transporter 1  inhibitor M22  on cognitive impairment of mice with epilepsy．  LIN Li － feng，LIANG Wei，LIU Zhou，et al． Department of Neurology，Affiliated Hospital of Guangdong Medical University，Zhanjiang Guangdong 524001，China．

【Abstract】 Objective     To  observe  the  effect  of  glycine  transporter 1  inhibitor  ( M22 ) on  cognitive  impairment  of  mice  with  epilepsy． Methods    40 C57BL /6 mice were injected intraperitoneally with PTZ to establish chronic ignited epilepsy model．  They were randomly divided into model group ( 20) and M22 group ( 20) ，and another 10 mice were in the control group and received intraperitoneal saline injection for 2 weeks． M22 group was given intragastric administration of 40 mg / ( kg·d) M22，and the model group and the control group were given normal saline for 2  weeks．  Morris water maze test was used to evaluate the learning and memory function of the mice: the escape latency，the percentage of total time spent  in the target quadrant and the percentage of total distance in the target quadrant．  Brain tissue was taken after sacrifice and pathological obser- vation of hippocampus was performed．  The apoptosis of cerebral cortical neurons and the B cell lymphocyte / leukemia － 2 ( Bcl － 2) ，Bcl － 2 relat- ed X protein ( Bax) ，cysteine aspartate protein hydrolase ( Caspase － 3) were detected in cortical neurons of cerebral cortex．  Ｒesults    The escape

latency  of the mice in the M22 group and the model group were significantly longer than those of the control group ( P ＜ 0． 05) ．  The escape laten- cy of the M22 group was significantly shorter than that of the model group ( P ＜ 0． 05) ．  The escape latency of the 3 groups were significantly short- ened  with time ( P ＜ 0． 05) ．  The percentage of total time spent in the target quadrant，the percentage of total distance in the target quadrant of the

mice and the relative expression of Bcl － 2 protein of cerebral cortex of the M22 group and the model group were significantly lower than those of the control  group ( P  ＜ 0． 05) ，while the above indexes of the M22 group were significantly higher than those of the model group ( P ＜ 0． 05) ．  Hipp- ocampal histopathology found that the cells in the model group was arranged in disorder，the structure and the outline were blurred，and there were

significant vacuoles like changes in the nerve cells．  In the M22 group，the cell profile was clear，a small number of cell vacuoles were denatured， and there was no obvious necrosis．  The apoptosis，the relative expression of Bax and Caspase － 3 protein of cerebral cortical of the M22 group and the

model group were significantly higher than those of the control group ( P ＜ 0． 05) ，while the above indexes of the M22 group were significantly lower than those of the model group ( P  ＜ 0． 05) ．  Conclusion    M22 can significantly improve cognitive impairment in epileptic mice．  It may inhibit the

apoptosis neurons by enhancing the expression of Bcl － 2 protein and inhibiting the expression of Bax and Caspase － 3 protein of cerebral cortical．

【Key words】 Mice; Epilepsy; Glycine transporter 1  inhibitor; Cognitive impairment; Apoptosis related protein

癫痫是大脑神经元过度重复放电，而导致大脑功能短暂障碍的一种慢性疾病。临床调查表明，发展中国家癫痫发病率为 0． 1%  ～ 0． 15% ，是发达国家的 2  ～ 3倍^［1］。癫痫患者中约 30% ～ 40% 的癫痫患者存在认知

基金项目: 国家自然科学基金( 编号: 81400986 ) ; 湛江市非资助科技计划( 编号: 2017B01019)

*   通讯作者: 钟望涛，E － mail: gthappy1@ 163． com

功能损害，癫痫反复发作可对脑各功能区产生损害，进 而影响患者认知功能，对患者的生活及工作造成严重影 响^［2，3］。因此，抗癫痫的治疗不仅要注重控制神经元的过度放电，更需注重治疗过程中的认知功能损害。研究发现^［4］，甘氨酸转运体 1 ( GlyT1) 抑制剂( M22) 具有抗 癫痫作用，但关于其对癫痫认知功能的改善作用研究尚 少。鉴于此，本研究通过建立小鼠慢性点燃癫痫模型，